Question
Quel est le protocole optimal de lyse utilisant NaOH, EDTA et TRIS en laboratoire ?
1 réponse
Pour réaliser une lyse optimale en utilisant NaOH, EDTA et TRIS, suivez ce protocole précis. Préparez une solution de lyse contenant 0,2 M NaOH et 1% SDS pour dénaturer les protéines et solubiliser les membranes cellulaires. Ajoutez 10 mM d'EDTA pour chélater les ions divalents tels que Mg²⁺ et Ca²⁺, inhibant ainsi les nucléases qui pourraient dégrader l'ADN. Incorporez 50 mM de TRIS (pH 8,0) pour stabiliser le pH de la solution, assurant une efficacité optimale de la lyse.
Mélangez délicatement la solution de lyse avec l'échantillon cellulaire. Incubez à température ambiante pendant 5-10 minutes, en agitant doucement pour homogénéiser. Neutralisez la solution avec une solution tampon appropriée (pH ~7) pour stabiliser le pH.
Utilisez un distributeur de réactifs, tel que ceux de SLS Select, pour garantir une distribution précise et répétable des volumes de solutions. Ces distributeurs permettent un calibrage facile et sont autoclavables, assurant une manipulation stérile et sûre des réactifs. Cela garantit une lyse efficace, avec un minimum de dégradation de l'ADN pour des résultats expérimentaux optimaux.
Mélangez délicatement la solution de lyse avec l'échantillon cellulaire. Incubez à température ambiante pendant 5-10 minutes, en agitant doucement pour homogénéiser. Neutralisez la solution avec une solution tampon appropriée (pH ~7) pour stabiliser le pH.
Utilisez un distributeur de réactifs, tel que ceux de SLS Select, pour garantir une distribution précise et répétable des volumes de solutions. Ces distributeurs permettent un calibrage facile et sont autoclavables, assurant une manipulation stérile et sûre des réactifs. Cela garantit une lyse efficace, avec un minimum de dégradation de l'ADN pour des résultats expérimentaux optimaux.
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