Les spectrofluorimètres mesurent les spectres d'émission ou d'excitation de molécules afin d'analyser l'influence de l'environnement sur le processus de fluorescence. Ils permettent également de mesurer l'intensité et la polarisation de fluorescence. Les spectres d'émission sont réalisés à une longueur d'onde d'excitation donnée afin d'observer le spectre de lumière provoqué par la fluorescence, tandis que les spectres d'excitation sont obtenus à une longueur d'onde donnée pour mesurer l'excitation.
Les spectrofluorimètres sont équipés d'un porte-cuve et d'un système d'agitation magnétique. Selon les modèles, la bande passante en émission et en excitation est variable d'une dizaine à plusieurs centaines de nanomètres.
L'analyse de la fluorescence grâce au spectrofluorimètre est le plus souvent réalisée sur des protéines ou pour étudier les interactions moléculaires.
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